ชุดตรวจหาแอนติเจนในเลือดอย่างรวดเร็ว, ชุดทดสอบแอนติเจนที่บ้าน 150-250ul

ด้วยเครื่องมือแพทย์ IVD เพื่อทำ SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Rapid Test Kit

ชุดทดสอบแอนติบอดีเรืองแสงเป็นกลาง & การทดสอบอย่างรวดเร็วของแอนติบอดีทำให้เป็นกลาง

การทดสอบแอนติบอดีที่ทำให้เป็นกลางของ pseudovirus ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (5).โดยย่อ เซลล์ Vero ถูกเพาะในเพลต 96 หลุมเพื่อผลิตเป็นชั้นเดียวในเวลาของการติดเชื้อปริมาณ rVSV-SARS-Cov-2 ที่ปรับสภาพแล้ว [phCMV3-SARS-CoV-2 ขัดขวาง SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (โปรตีนเรืองแสงสีเขียว) ถูกสร้างขึ้นโดยการทรานส์เฟกเซลล์ HEK293T, ATCC CRL-3216] ถูกฟักตัว ด้วยพลาสมาของมนุษย์ที่เจือจางเป็นลำดับที่ 37°C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงก่อนที่จะเติมลงในโมโนเลเยอร์เซลล์ Vero ที่ไหลมารวมกัน (ATCC CCL-81) ที่ไหลมารวมกันในเพลต 96 หลุมเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 12 ถึง 16 ชั่วโมงที่ 37°ซ ใน 5% CO2.จากนั้นเซลล์จะได้รับการแก้ไขในพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% ย้อมด้วย Hoechst 1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และถ่ายภาพโดยใช้เครื่องสร้างภาพ CellInsight CX5 เพื่อหาจำนวนเซลล์ที่แสดง GFPการติดเชื้อถูกทำให้เป็นมาตรฐานตามจำนวนเซลล์เฉลี่ยที่ติดเชื้อ rVSV-SARS-CoV-2 ที่ฟักตัวด้วยพลาสมาของมนุษย์ปกติLOD ถูกกำหนดขึ้นเป็น <1:20 บนพื้นฐานของตัวอย่างพลาสมาจากกลุ่มควบคุมที่ยังไม่ได้เปิดเผยสัญญาณลบถูกตั้งค่าเป็น 1:19IC การทำให้เป็นกลาง50 (ความเข้มข้นของการยับยั้งค่ามัธยฐาน) คำนวณโดยใช้การถดถอย One-Site Fit LogIC50 ใน GraphPad Prism 8.0

การทดสอบการวางตัวเป็นกลางโดยใช้ฟลูออเรสเซนซ์ที่มีปริมาณงานสูง

เพื่อเติมเต็มช่องว่างสำหรับการวินิจฉัยโรคโควิด-19 และการประเมินวัคซีน เราได้พัฒนาการทดสอบโดยใช้สารเรืองแสงที่วัดการทำให้เป็นกลางของรายงาน SARS-CoV-2 อย่างรวดเร็วและเชื่อถือได้ด้วยแอนติบอดีจากตัวอย่างของผู้ป่วยการทดสอบนี้สร้างขึ้นบน mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 ที่เสถียร ซึ่งยีน mNG ได้รับการออกแบบที่ ORF7 ของจีโนมไวรัส (รูปที่1a)10.ลำดับที่สมบูรณ์ของ mNG SARS-CoV-2 ได้อธิบายไว้ในรูปที่1.รูป1bแสดงให้เห็นผังงานของการสอบวิเคราะห์การทำให้เป็นกลางของผู้รายงานในรูปแบบ 96 หลุมโปรโตคอลการทดสอบมีรายละเอียดในวิธีการเสริมโดยสังเขป ซีรั่มของผู้ป่วยถูกเจือจางเป็นลำดับและบ่มเชื้อด้วยไวรัสนักข่าวหลังจากการฟักไข่ที่ 37°C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เซลล์ Vero CC-81 (เพาะเมล็ดล่วงหน้าในจาน 96 หลุม) ติดไวรัส/เซรั่มผสมที่หลายหลากของการติดเชื้อ (MOI) ที่ 0.5ที่ 16 ชั่วโมงหลังการติดเชื้อ เซลล์ที่เป็นบวก mNG ถูกหาปริมาณโดยใช้เครื่องอ่านภาพที่มีเนื้อหาสูง (รูปที่1b).ควรสังเกตว่าเซลล์ Vero CC-81 ไม่ใช่เซลล์ Vero E6 ถูกเลือกสำหรับการทดสอบ mNG เพื่อให้สามารถหาปริมาณเซลล์เรืองแสงได้อย่างแม่นยำตัวอย่างซีรั่ม COVID-19 หกสิบชิ้นจากผู้ป่วยที่ได้รับการยืนยัน RT-PCR และตัวอย่างซีรั่มที่ไม่ใช่ COVID-19 60 ตัวอย่าง (เก็บถาวรก่อนการเกิด COVID-19) วิเคราะห์โดยใช้ไวรัสผู้รายงานสำหรับตัวอย่างที่มีผลบวกของ COVID-19 บางตัวอย่าง วันที่เก็บตัวอย่าง RT-PCR ที่เป็นบวกของไวรัสนั้นมีอยู่และระบุไว้ในตาราง​ตารางที่ 1.1.หลังจากนักข่าวติดเชื้อไวรัส เซลล์จะเปลี่ยนเป็นสีเขียวเมื่อไม่มีซีรั่ม (รูปที่1c, แผงด้านล่าง);ในทางตรงกันข้าม การฟักตัวของไวรัสนักข่าวด้วยเซรั่มผู้ป่วย COVID-19 ทำให้จำนวนเซลล์เรืองแสงลดลง (แผงด้านบน)กราฟการตอบสนองต่อขนาดยาได้รับมาระหว่างจำนวนเซลล์เรืองแสงและเท่าของการเจือจางในซีรัม (รูปที่1 วัน และรูปประกอบ 2) ซึ่งอนุญาตให้กำหนดพับการเจือจางที่ทำให้เป็นกลาง 50% ของเซลล์เรืองแสง (NT50).นักข่าววิเคราะห์อย่างรวดเร็ววินิจฉัย 120 ตัวอย่างภายใน 24 ชั่วโมง: ทั้งหมด 60 ซีรั่ม COVID-19 (ตัวอย่าง 1–60) แสดง NT เป็นบวก50 จาก 35 ถึง 5711 และซีรั่มที่ไม่ใช่ COVID-19 ทั้งหมด 60 รายการ (ตัวอย่าง 61–120) แสดง NT เชิงลบ50 จาก <20 (ตาราง 1).

พารามิเตอร์: